n  试剂盒简介

MycoSHENTEK®支原体验证菌株用于验证支原体核酸检测方法（NAT）的稳定性和灵敏度。

支原体培养检测方法耗时，对于细胞治疗类产品，检测周期长于产品生命周期。用

核酸检测，如荧光定量 PCR 方法来检测支原体，用时短，可快速检测样品中支原体污染情况。根据最新的 EP、USP、中国药典等，核酸检测方法经过全面方法验证，可以替代培养法。依据 EP 2.6.7 对支原体核酸检测方法的要求，需对方法的灵敏度进行验证，以确定可替代的药典方法（方法灵敏度达到 10 CFU/mL 可替代培养法，方法灵敏度达到 100 CFU/mL 可替代指示细胞培养法）。

MycoSHENTEK®支原体验证菌株为经培养法测定 CFU（colony forming units），且灭活的支原体菌液，无感染风险，不能用于培养；每管含 10 CFU 或 100 CFU 支原体；加入相应体积的样品基质即可使用。

湖州申科同时提供 MycoSHENTEK^®支原体 DNA 提取纯化试剂盒（磁珠法）和 MycoSHENTEK®支原体 DNA 检测试剂盒（PCR-荧光探针法），用于支原体 DNA 的提取和 PCR 检测。

n  试剂盒组分

n  有效期

规定储存条件下 6 个月，具体见标签。

n  实验所需但试剂盒中未含材料

Ø 1.5 mL 无菌无 DNA 或 RNA 的低吸附离心管

Ø 96 孔 qPCR 板

Ø 1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL 无菌无 DNA 或 RNA的低吸附带滤芯枪头

n  相关设备

Ø  荧光定量 PCR 仪

Ø  1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL 移液枪

n  产品使用说明

1.        在 2-8 ℃条件下融化支原体验证菌株。

2.        在涡旋振荡器上振荡旋涡 10 秒，短暂离心 5 秒，离心转速≥6000 rpm。

3.        根据标签上验证菌株的体积，在每管中加入适当体积的样品基质，根据所需要达到的浓度加入对应的体积。

4.        在涡旋振荡器上振荡旋涡 10 秒，短暂离心 5 秒，离心转速≥6000 rpm。

5.        提取 DNA 后，采用定量 PCR 系统进行 PCR 检测。注：

1)        每种规格的菌株都不能稀释，稀释会引起菌体分布不均匀从而产生未检出风险。

2)        所有的试剂和样品在使用前必须平衡到室温。强烈建议在 PCR 前对样品进行适当的 DNA 提取，以减少 PCR 抑制的风险，并最大限度地提高灵敏度

3)        对于 10 CFU/管的菌株，为提高检出率，实验操作建议如下：

在 2-8 ℃条件下融化支原体验证菌株。

根据标签上验证菌株的体积，在每管中加入适当体积的样品基质，补足到总体积为 1 mL，使支原体浓度为 10 CFU/mL。

在涡旋振荡器上振荡旋涡 10 秒，置于高速离心机中，16000 g，2-8 ℃条件下离心 30 分钟。

小心取出菌株管，注意不要振荡，以免菌株悬浮，慢慢吸去上清 500 μL，取下层 500 μL（尽量保证取到全部菌株）用枪适当混匀后，进行 DNA 提取。

提取 DNA 后，采用定量 PCR 系统进行 PCR 检测。

n  产品注意事项

1.       勿将不同批次试剂混合使用。

2.       试剂不得超过保质期使用。

3.       与产品使用说明不符的任何操作偏差都可能影响结果。

4.       PCR 的抑制可能是由样品基质引起的；阴性对照应用相同的样品基质进行处理。

5.       对于每个样品检测，应至少检测一个阴性对照。

6.       本产品仅限于专业人员的科学研究和质量控制，不得用于临床诊断或治疗。

7.       为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

修订日期：2023 年 07 月 04 日

生效日期：2023 年 07 月 04 日

MycoSHENTEK^®支原体验证菌株用于验证支原体核酸检测方法（NAT）的稳定性和灵敏度。

MycoSHENTEK^®支原体验证菌株为经培养法测定CFU（colony forming units），且灭活的支原体菌液，无感染风险， 不能用于培养；每管含10CFU；加入相应体积的样品基质即可使用。