分枝杆菌验证菌株为经培养法测定CFU（colony forming units），且灭活的分枝杆菌菌液，无感染风险，不能用于培养；每管含10CFU或100CFU分枝杆菌；加入样品基质中即可使用。

n  试剂盒简介

生物制品生产过程中所使用生物源性材料均应进行分枝杆菌检测，分枝杆菌培养法检测耗时，检测周期长达 56 天。而用核酸检测法，如荧光定量 PCR 方法，用时短，可快速检测样品中分枝杆菌污染情况。根据最新的 EP、USP、中国药典等要求，核酸检测方法若经过全面方法验证，可以替代培养法。

MycoSHENTEK®分枝杆菌验证菌株为经培养法测定 CFU（colony forming units），且灭活的分枝杆菌菌液，不适用于培养，无感染风险；每管含 10 CFU 或 100 CFU 分枝杆菌；加入样品基质中即可使用。

湖州申科同时提供 MycoSHENTEK®分枝杆菌 DNA 提取纯化试剂盒（磁珠法）和 MycoSHENTEK®分枝杆菌 DNA 检测试剂盒（PCR-荧光探针法），用于分枝杆菌 DNA 的提取和 PCR 检测。

n  试剂盒组分

n  有效期

新金色分枝杆菌验证菌株规定储存条件下 6 个月，具体见标签。

草分枝杆菌验证菌株规定储存条件下 12 个月，具体见标签。

n  实验所需但试剂盒中未含材料

Ø 1.5 mL 无菌无 DNA 或 RNA 的低吸附离心管

Ø 96 孔 qPCR 板或八联管

Ø 1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL 无菌无 DNA 或 RNA的低吸附带滤芯枪头

n  相关设备

Ø  荧光定量 PCR 仪

Ø  1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL 移液枪

n  产品使用说明

1.        在 2-8 ℃条件下融化分枝杆菌验证菌株。

2.        在涡旋振荡器上旋涡振荡 10 秒，瞬时离心 3 秒。

3.        根据标签上验证菌株的体积，在每管中加入适当体积的样品基质，根据所需要达到的浓度加入对应的体积。

4.        在涡旋振荡器上旋涡振荡 10 秒，瞬时离心 3 秒。

5.        提取 DNA 后，采用定量 PCR 系统进行 PCR 检测。

注：

1)        每种规格的菌株都不能稀释，稀释会引起菌体分布不均匀从而产生未检出风险。

2)        所有的试剂和样品在使用前必须平衡到室温。强烈建议在 PCR 前对样品进行适当的 DNA 提取，以减少 PCR 抑制的风险，并最大限度地提高灵敏度。

3)        对于 10 CFU/管的菌株，为提高检出率，实验操作建议如下：

·在 2-8 ℃条件下融化分枝杆菌验证菌株（10 CFU）。

·在每管中加入适当体积的样品基质，补足到总体积为 500 μL。

·在涡旋振荡器上旋涡振荡 10 秒，瞬时离心 3-5 秒。

·按照说明书方法进行 DNA 提取。

·提取 DNA 后，采用定量 PCR 系统进行检测。

n  产品注意事项

1.       勿将不同批次试剂混合使用。

2.       不得使用超过保质期的试剂。

3.       与产品使用说明不符的任何操作都可能影响结果。

4.       PCR 的抑制可能是由样品基质引起的，阴性对照应用相同的样品基质进行处理。

5.       对于每次样品检测，应至少检测一个阴性对照。

6.       本产品仅限于专业人员的科学研究和质量控制，不得用于临床诊断或治疗。

7.       为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

修订日期：2023 年 05 月 05 日

生效日期：2023 年 05 月 08 日